nipt的构建文库步骤

NIPT (Non-Invasive Prenatal Testing) 技术是一种无创产前基因检测技术，目前已广泛应用于孕期基因诊断中。在NIPT检测中，样本即为孕妇血浆，不需要任何侵入性的操作，准确率高、安全性好，因此备受孕妇和医生的欢迎。NIPT的构建文库是实现NIPT检测的重要步骤，下面我们就来介绍一下NIPT的构建文库步骤。



第一步：提取DNA



NIPT检测的样本是孕妇血浆，其中混杂着大量的游离胎儿DNA，因此首先需要从孕妇血浆中提取出全部的总DNA。通常采用磁珠吸附法来进行提取，此法操作简单、稳定性好，能够有效地提取出足量的总DNA。



第二步：建立文库



文库是指将提取出的总DNA进行一定的处理后，将所需的DNA片段插入到载体DNA中，然后进行扩增和测序的库。建立NIPT文库的关键在于如何区分孕妇和胎儿DNA，也就是所谓的SNP(genotyping)。



通常采用引物特异性PCR扩增和文库构建技术来进行筛选和分离，此法可以选择特异性的引物筛选出目标片段，并且可以建立大量复制的DNA，以确保测序的准确性和重复性。同时，还需要通过质量控制来排除低质量的DNA片段，以保证建立的文库质量。



第三步：高通量测序



建立好文库后，还需要进行高通量测序，即将文库中的DNA片段进行测序分析，得出DNA片段序列信息。目前常用的测序平台有Illumina HiSeq 2000，Illumina MiSeq，Ion Torrent PGM等，其中Illumina平台检测准确性高，而Ion Torrent平台检测速度快。



第四步：数据分析



测序出来的数据需要经过数据分析，利用生物信息学的方法对所测序列进行比对、注释、过滤、标记等多个步骤并进行统计，以得出孕妇和胎儿的DNA片段比例和复杂度，以及潜在的遗传突变等信息，并且进行校验和重复性的检测，从而确保数据的可信度和准确性。



NIPT的构建文库是实现NIPT检测的重要步骤之一，整个步骤需要先提取DNA，然后建立文库，进行高通量测序，最后进行数据分析，才能得出可靠的结果。NIPT技术的应用，不断推动着孕婴保健事业更好的发展，我们对此充满期待和期望。