nipt检查建库原理

NIPT检查建库原理



NIPT (Non-invasive Prenatal Test)是一种无创产前检测方法，通过血液样本中的胎儿DNA，非常准确地检测胎儿的染色体异常情况。NIPT检查建库是整个检测流程中的重要一环，以下详细介绍建库原理。



一、DNA提取



需要从孕妇的血液样本中提取DNA。通常使用血浆或全血作为样本。DNA提取的目的是获取足够的DNA量，以便后续的建库、测序和分析。



二、建库



因为NIPT是通过分析胎儿DNA中的染色体情况来判断胎儿是否有染色体异常，所以需要将胎儿DNA与母亲DNA分离。建库就是将这两者分开的过程。在建库过程中，首先将DNA进行文库构建，即将DNA片段连接到测序文库中。文库是指将DNA片段连接到载体(如PCR产物或质粒)上，以便于高通量测序。



文库构建是一个复杂的过程，需要经过以下步骤：



1. 先将DNA片段加上接头，使之适合于连接到测序文库中。



2. 将文库进行PCR扩增，以增加文库中的DNA片段数量。这一步骤需要注意控制PCR的扩增条件，以确保文库中的DNA片段长度合适。



3. 将PCR产物进行净化和检测，确保PCR反应成功，并且文库中的DNA片段长度符合要求。



三、高通量测序



完成建库后，下一步就是高通量测序。高通量测序指的是大规模的并行测序，采用多通道实现同时对多个样品进行测序，大大提高了测序效率和精度。高通量测序技术多种多样，包括Illumina测序、Ion Torrent测序等。



对于NIPT检测而言，通常采用Illumina平台进行测序。这是因为Illumina平台具有高通量、高准确度和较低的测序误差等优点。在Illumina测序中，建库文库片段将被固定在小的玻片上 (cluster generation)，并进行PCR扩增，然后将每个文库片段读取出来，得到几百万级别的序列数据。



四、序列分析



在高通量测序完成后，需要对序列数据进行分析。序列分析的目的是对序列数据进行处理，以便提取有用信息，如基因型和染色体异常。



序列分析通常包括以下步骤：



1. 过滤并去除低质量序列以及引物污染序列。



2. 将序列比对到参考基因组，以确定该序列的来源。



3. 对比对结果进行分析，确定胎儿的基因型和染色体异常情况。



以上就是NIPT检查建库的原理。NIPT检查的发明和使用，大大提高了产前诊断的准确性和安全性，对孕妇和胎儿都具有重要的临床意义。